血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离 出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。
血清最大的劣势就是不稳定,不稳定原因如下:
1、来源不稳定
以胎牛血清为例,怀孕母牛在屠宰前腹部被剖开,取出胎牛,在低温无菌条件下,刺破胎牛的心脏以获取血清。就这一条,动物伦理组织就可以把你拦住唠唠。另外,牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家,我国在对牛血清的质量《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000》中提出比较严格的标准要求,包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,细胞增殖支持等检查。
2、组分不稳定
还有最让人闹心的,动物血清成分复杂,其组分及含量常和动物性别(公胎牛,母胎牛,如激素)、年龄、生理状态、营养条件不同而有差异,是不是觉得特像中药。还有,尽管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的组分,所以导致标准化极其困难。所以,不同的血清差异很大,就是同一的不同批次血清差异也很大。
3、用法不稳定
实验习惯的不同,都可能导致细胞实验结果的不稳定,比如,有人四度过夜融化,有人急性子,直接扔进水浴锅。新手拿到一瓶血清,第一个问题就是问自己,要不要灭活?血清同时含有内毒素、血色素、补体、抗体等其他有害成分,影响细胞生长甚至导致细胞死亡,对某些实验来说,极为重要。
解决方案:
1、土豪和有得选择的实验室,请选择无血清培养基。
2、不要频繁更换血清牌子,不同血清来源,工艺,包装运输等都有很大差异,尽量不要更换牌子。
3、选定品牌后,对于经过测试过的好用的血清,同一个批次多囤积一些,计算本次实验的大概用量,然后在多加20%的储备,放在-20或-80度保存。
4、细胞实验建议每个人用自己的培养基,PBS,胰酶等试剂以及用具,保持实验条件一致性,避免交叉污染,别给自己添堵,也别给别人添堵。
5、如果实在要更换血清,先将细胞在新的血清里传两到三代,适应新的条件后,细胞状态稳定,再进行后续的实验。