ELISA( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )是酶联接免疫吸附剂测定的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。酶联免疫吸附实验原理：免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。
ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：
ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用;
封闭液一般是BSA（牛血清白蛋白）、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。
蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。
除此外，封闭剂还可用5%的脱脂乳，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。
SA是常用的封闭剂，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的， BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多的针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA、脱脂奶粉等封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭剂封闭。大部分BSA中有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或使得本底水平增高。
封闭血清的原理主要有两点，一是待检样本会有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
脱脂奶粉的优点是价钱便宜，但是由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有,不能用于标记的抗体系统。
酪蛋白 和BSA作用类似，普通酪蛋白不易溶解。中性和碱性条件下带有负电性，与同样带负电荷胶体金之间存在排斥力，而膜一般都是带正电荷，会与酪蛋白有一定的吸附作用，用酪蛋白封闭效果好些。无蛋白化合物 甲醛：与PVDF膜表面的微结构反应或者结合，使之失去结合蛋白的疏水力或者空间结构域。去污剂(吐温-20)：Tween-20是一种非离子型去污剂，有复性抗原的作用，与膜疏水性吸附，有很强的对非特异性吸附的洗脱作用，同样可以降低蛋白间的疏水作用，可提高特异性的识别能力。
封闭（blocking）是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月。
封闭是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。*常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。
