鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
1、PCR的基本步骤
2、反应原理
鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒荧光PCR如何实现实时监控的呢?
1、PCR反应体系中加入荧光染料
2、所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分(检测器、激发光源、热循环模块)
3、在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强
4、每个循环结束后,定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加
5、PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析ARMS检测方法;1个SNP位点设计双管反应,含目的基因检测及内参检测双通道。
鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒特点:
1、准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2、高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3、快速:整个检测流程只需3小时。
4、简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5、防污染
6、高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。