pGEM-3ZEVL Seamless Cloning Kit（线性化质粒）

产品编号： P-PR1229

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P-PR1229-20μl		20μl	¥1560.00	登录查看
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商品属性：

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pGEM-3ZEVL Seamless Cloning Kit（线性化质粒）	20 μl	P-PR1229

保存条件：-20℃保存
产品介绍：
pGEM-3ZEVL 为克隆载体，载体骨架小，连接效率高，具有氨苄青霉素抗性。本产品提供经 EcoRⅤ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个 DNA 片段组装到载体上。无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
产品特点：
1. pGEM-3ZEVL 为克隆载体，载体骨架小，连接效率高。
2. pGEM-3ZEVL 载体具有氨苄青霉素抗性。。
3. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段 DNA。
4. 可以克隆长片段和多片段 DNA。
操作步骤：
1. pGEM-3ZEVL 线性化载体使用方法：
(1) pGEM3ZEVL 当做克隆载体使用，可以在扩增 PCR 产物的
上游引物 5’端添加序列：TCGGTACCCGGGGATCCGAT，
下游引物 5’端添加序列：TGCAGGTCGACTCTAGAGAT，
就可以通过无缝克隆连接到 pGEM3ZEVL 中。
(2) 测序引物：
M13F：GTAAAACGACGGCCAGT
M13R：CAGGAAACAGCTATGAC

2. 载体片段的重组连接

（1）在一个 0.2ml PCR 管中依次加入

（2）操作：轻轻混合，离心数秒。在 PCR 仪上 50℃保温 15 分钟。反应结束后，将离心管置于冰上，等待细菌转化。如暂时不转化细菌，可冻存于-20℃。
注意：
（1）载体用量一般在 50-100ng 较好。载体和片段的摩尔比为 1:1 至 1:3。片段小于 200bp时，片段用量可增加到载体的 5 倍量。如果片段较多，可适当增大体系，如 20μl 。
（2）多片段连接，50℃反应时间不要超过 60 分钟。
3.转化：具体操作以感受态细胞操作说明书为准
4.阳性克隆鉴定：（1）菌落 PCR 方法；（2）限制性酶切分析方法；（3）DNA 测序分析方法。

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