公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
商品属性:
产品名称
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规格
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货号
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Bst 2.0 DNA/RNA polymerase
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1600U
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P-PR1117
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储存条件:-20℃保存
产品简介:
Bst2.0 DNA/RNA 聚合酶是嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)DNA 聚合酶 I 大片段(Bst LF)经过基因突变改造
过的聚合酶。该酶具有 5’-3’的 DNA 聚合酶活性和链置换活性,无 5’-3’核酸外切酶活性。与野生型 Bst LF DNA 聚合酶相比,Bst 2.0DNA/RNA 聚合酶的热稳定性、扩增速度、链置换速度和耐盐,耐 dUTP 等性能都有很大的提升。Bst2.0 DNA/RNA 聚合酶还具有逆转录活性。非常适合 LAMP 类型的等温扩增实验。
活性单位: 一个活力单位(1 U)即在 65°C 条件下,30 分钟内催化 25 nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
质量控制:SDS-PAGE 检测纯度大于 99%,经检测无核酸外切酶,内切酶活性,无细菌基因组 DNA 残留。通过各种模板进行等温扩增测试。室温存放一周,无明显活性改变。
应用范围:
1.DNA 或 RNA 为模板的 LAMP 等温扩增。
2.适用于链置换方法扩增 DNA。
3.高 GC 结构 DNA 的测序和微量 DNA 模板快速测序。
10×Bst Buffer:200 mM Tris-HCl,100 mM (NH4)2SO4,500 mM KCl,80mM MgSO4,1% Tween® 20
pH 8.8@ 25°C。
储存缓冲液:10 mM Tris-HCl,50 mM KCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% Glycerol,0.1% Triton
® X-100,pH 7.5 @ 25°C。
使用方法:
1. 按以下组分配制 LAMP 等温扩增反应液,建立反应体系
2. 混匀,离心数秒,置于控温设备中 65℃反应 30-60min。
3. 反应结束后 85℃,5min 失活聚合酶。电泳检测或肉眼观察并记录结果。
注意:
1.Primer Mix(10×)配制方法,用灭菌水将引物全部溶解至浓度为 100µM 的储存液。取一干净离心管,先加 56 μL 灭菌水,然后取FIP 和 BIP 引物各 16 μL, LF 和 LB 各 4 μL,F3/B3 各 2μL,混匀即可。
2.反应体系中可以添加 dUTP 和热敏 UDG 酶。经测试占比 50%的 dUTP(0.7mM)完全不影响 Bst 酶活性。热敏 UDG 酶用量可按供应商的推荐用量和方法添加。
3.可使用带热盖加热的 PCR 仪以及金属加热块或恒温水浴作为控温设备。无热盖加热装置,需要在反应管中添加一滴石蜡油,防止反应液蒸发。
4.可以在反应体系中添加适当浓度的 SYTO®-9、EvaGreen
® 、SYBR
® Green I 等荧光染料分子,用于实时荧光等温扩增。
5.为防止扩增产物污染造成假阳性结果,最好在其它房间对阳性样本进行 2%以上浓度的琼脂糖凝胶电泳检测。