血液基因组 DNA 提取系统（0.1~20 ml）（非离心柱型）

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性：

提取得率（根据血液样品中白细胞数量的不同，DNA 产量会有所差异）

产品特点：
量大质优：提取 0.1-20 ml 各种血液，可获得多达 2-400 μg 高纯度 DNA。
安全可靠：无苯酚、氯仿等有机溶剂的污染。
价廉物美：与同类产品相较，性价比高，纯化得到的 DNA 样品可长期保存。
注意事项： 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.血液样品反复冻融，会导致提取的 DNA 片段较小、且提取量下降。所得基因组 DNA 也应尽可能避免反复冻融，以免断裂。
2.血液样品的储存：
a）短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在 2-8℃储存最多 10 天，对于某些实验例如 Southern Blot 等，需要得到完整全长的基因组 DNA，请将血液样品在 2-8℃储存不超 过 3 天，此时基因组 DNA 的降解程度较轻。
b）长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的 DNA，推荐使用 EDTA 作为抗凝剂）
3.所有离心操作均可在室温下完成。
一、小体积全血操作流程（<600 μl 血样；以 300 μl 血液处理量为例）
1.向 300μl 抗凝剂的血液中加入 750 μl 细胞裂解液 CLA，颠倒混匀 20 次。
注意：为方便与离心机配套使用，可加入与血液等体积的细胞裂解液 CLA, 重复裂解两次。
2.12,000 rpm(~13,400×g)，离心 1 min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水
纸上停留 2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3.按照表 1 配制缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后 1 h 之内用完。
4.加入 200μl 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液， 立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液后要立刻涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现大量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液（具体补加量见表 1），再次涡旋混匀。
5.65℃水浴 10 min，其间颠倒混匀数次。
6.加入 200 μl 异丙醇，上下颠倒混匀 50 次至出现丝状或簇状基因组 DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要，应该仔细观察。
7.12,000 rpm(~13,400×g)，离心 5 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的 DNA 沉淀。
8.加入 300 μl 70%乙醇，涡旋振荡 5 sec，12,000 rpm(~13,400×g)，离心 2 min，倒弃上清。
9.将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
10.空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净（至少 5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。但是要避免过分干燥 DNA 沉淀，因为过于干燥的 DNA 很难溶解。
11.加入 200 μl 缓冲液 TB，低速涡旋 5 sec，65℃加热 20 min 溶解 DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如有难溶性物质存在，可将 65℃孵育时间延长至 1h。
二、中量全血操作流程（1-10 ml 血样；以 5 ml 血液处理量为例）
1.向 5 ml 含抗凝剂的血液中加入 5 ml 细胞裂解液 CLA，颠倒混匀 20 次，3,600rpm(~2,000×g )离心 2 min，倒弃上清；
2.再向其中加入 7.5 ml 细胞裂解液 CLA，颠倒混匀 20 次，3,600 rpm(~2,000×g )离心 2 min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留 2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3.按照表 1 配制缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后 1 h 之内用完。
4.加入 3.3 ml 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现大量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液（具体补加量见表 1），再次涡旋混匀。
5.65℃水浴 10-30 min，其间颠倒混匀数次。
6.加入 3.3ml 异丙醇，上下颠倒混匀 50 次至出现丝状或簇状基因组 DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要，应该仔细观察。
7.3,600 rpm(~2,000×g )，离心 8 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的 DNA 沉淀。
8.加入 5 ml 70%乙醇，涡旋振荡 5 sec，3,600 rpm(~2,000×g )，离心 3 min，倒弃上清。
9.将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
10.空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净（至少 5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。但是要避免过分干燥 DNA 沉淀，因为过于干燥的 DNA 很难溶解。
11.加入 500 μl 缓冲液 TB，低速涡旋 5 sec，