非蛋白巯基测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
自备仪器和用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体18 mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清，培养液：取0.1mL样本，加入0.4mL提取液，混匀，室温静置10min, 然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、 酶标仪预热30min，调节波长至412nm。
2、 操作表
在96孔板中加入如下试剂
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对照管
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测定管
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样品（μL）
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40
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40
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试剂一（μL）
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150
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150
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试剂二（μL）
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10
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乙醇（μL）
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10
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混匀，25℃静置10min，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。
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非蛋白巯基测定试剂盒说明书计算公式：
非蛋白巯基标准曲线：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x为标品浓度，单位μmol/mL，y为吸光度ΔA。
1. 组织：
（1）按样本重量计算
非蛋白巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
非蛋白巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培养液：
非蛋白巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事项
最低检出限为10μmol/L。
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