原果胶含量试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理：
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530 nm处有特征吸收峰。
自备仪器和样品：
天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一：液体100mL×2瓶，4℃保存。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，4℃保存。
试剂一：浓硫酸，自备。
试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列（建议取约0.05g样品，加入1mL提取液一），置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，取出冷却后于5000g、 25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
测定操作表
|
|
空白管
|
标准管
|
对照管
|
测定管
|
|
样本（μL）
|
|
|
30
|
30
|
|
标准品（μL）
|
|
30
|
|
|
|
浓硫酸（μL）
|
180
|
180
|
180
|
180
|
|
混匀、90℃水浴10min，取出后冷却
|
|
试剂二（μL）
|
|
|
30
|
|
|
试剂三（μL）
|
30
|
30
|
|
30
|
|
混匀，25℃静置30min
|
|
蒸馏水（μL）
|
90
|
60
|
60
|
60
|
|
充分混匀，取200μL置于微量石英比色皿/96孔板中，测定530nm处吸光值，分别记为A1、A2、A3和A4。△A1=A2-A1，△A2=A4-A3
|
原果胶含量试剂盒说明书注意：空白管和标准管只需测定一次。
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) = 0.25×△A2÷△A1÷W
C标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL； V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL； V样总：加入提取液体积，1mL； W：样本鲜重，g。
注意事项
1. 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
2. 若吸光值超过1，可将样本提取液进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 最低检出限为10μg/g。
关注手机微站
服务号
微信小程序
