半纤维素（hemicellulose）含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，广泛存在于植物中，是一种新型可利用能源。
测定原理：
半纤维素经酸处理后转化成还原糖，与DNS生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，吸光值大反映了半纤维素含量。
自备仪器和样品：
天平、40目筛，恒温水浴锅、烘箱、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板
试剂组成和配制
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理
样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛。
测定操作表
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空白管
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测定管
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样本（g）
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0.02
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试剂一（μL）
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1000
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90℃水浴10min，25℃，8000g离心10min，弃上清
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蒸馏水（μL）
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1000
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充分混匀，25℃，8000g离心10min，此步骤重复3次，取沉淀105℃，烘干至恒重
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试剂二（μL）
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200
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200
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90℃水浴1h，自然冷却
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试剂三（μL）
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200
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200
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混匀，25℃，8000g离心10min
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上清（μL）
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60
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60
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试剂四（μL）
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45
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45
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蒸馏水（μL）
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195
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195
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充分混匀，90℃水浴5min，自然冷却，25℃，8000g离心10min
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取200μL上清液于微量石英比色皿/96孔板，测定540nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管，ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
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半纤维素（hemicellulose）含量试剂盒说明书计算公式
a． 用微量石英比色皿计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.3968x+0.0306，R2=0.9961；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.3968÷（W÷V样总）
= 1.01×（△A-0.0306）÷W
b．用96孔板计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1984x+0.0306，R2=0.9961；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.1984÷（W÷V样总）
= 2.02×（△A-0.0306）÷W
W：样品质量，g；V样总：加入提取液体，0.4mL。
检测限为1mg/g。
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